Penelitian ini bertujuan menguji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun sirsak (Annona muricata L.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara in vitro. Metode ekstraksi menggunakan maserasi dengan pelarut etanol 96%. Uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram pada konsentrasi 25%, 50%, 75%, dan 100%. Kontrol positif menggunakan amoksisilin 30 μg. Hasil menunjukkan zona hambat tertinggi terhadap S. aureus pada konsentrasi 100% sebesar 18,3 ± 0,7 mm (kategori kuat), sedangkan terhadap E. coli sebesar 12,1 ± 0,5 mm (kategori sedang). Analisis fitokimia mendeteksi keberadaan alkaloid, flavonoid, tanin, dan saponin sebagai senyawa aktif antibakteri.